PLA邻位连接技术

实验原理

邻位连接技术（Proximity Ligation Assay，PLA）是一种可在原位检测单个细胞中蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质修饰及蛋白质定位的高灵敏度免疫学技术。

其基本原理是：使用两种针对目标蛋白（或同一蛋白的不同修饰位点）的一抗，分别来自不同物种。然后加入与一抗物种对应的PLA探针（由二抗与寡核苷酸链偶联而成）。当两个目标蛋白距离非常接近（通常小于40 nm）时，两种PLA探针的寡核苷酸链在加入的连接酶作用下发生环化连接。通过滚环扩增（RCA）产生数百倍的信号放大，形成可以在荧光显微镜下观察到的清晰点状信号。每个荧光点代表一个单一的蛋白-蛋白相互作用事件。

该技术可实现单分子水平的蛋白互作检测，适用于组织切片、细胞爬片等原位样本。

（PLA技术原理图）

服务流程

客户咨询——方案/实验材料确认——样品制备——抗体孵育——邻位连接反应——滚环扩增（RCA）——信号检测——数据分析

实验流程

PLA技术实验流程图（George et al., 2022）

服务内容及说明

适用场景

1、蛋白-蛋白相互作用原位验证：在细胞或组织原位验证两个蛋白是否存在相互作用。

2、蛋白修饰检测：检测特定蛋白的磷酸化、乙酰化等修饰水平（如检测p53磷酸化）。

3、低丰度蛋白检测：灵敏度高于传统免疫荧光，可检测低表达蛋白。

4、药物靶点验证：评估药物对蛋白复合物形成或蛋白修饰的影响。

实验周期

PLA实验 * 结果示例

参考文献

1、USP9X integrates TGF-β and hypoxia signalings to promote ovarian cancer chemoresistance via HIF-2α-maintained stemness

2、PLA2G7 promotes immune evasion of bladder cancer through the JAK-STAT-PD-L1 axis

3、Optimized proximity ligation assay (PLA) for detection of RNA-protein complex interactions in cell lines[J]. STAR protocols