荧光原位杂交（FISH）

服务简介

荧光原位杂交（Fluorescence In Situ Hybridization，FISH）是一种利用荧光标记的核酸探针，与细胞或组织切片中的目标DNA或RNA序列进行特异性杂交，从而在原始位置对其进行定性、定位和相对定量检测的分子细胞遗传学技术。

我们提供高质量的FISH检测服务，支持石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片、细胞涂片、染色体滴片等多种样本类型，可检测mRNA、lncRNA、miRNA、DNA序列，满足从基因定位到表达分析的多样化研究需求。

实验原理

1、FISH技术基于核酸碱基互补配对原则：

探针设计：针对目标核酸序列（DNA或RNA）设计特异性寡核苷酸探针，并标记荧光染料（如Cy3、FITC、Cy5等）。

2、样本变性：组织或细胞经固定、透化处理后，加热或加碱使目标核酸变性为单链。

3、杂交：将荧光探针与样本共孵育，探针与互补的目标序列特异性结合。

4、洗涤：去除未结合的探针，降低背景信号。

5、成像：DAPI复染细胞核，荧光显微镜下观察并采集图像。

实验流程

1、样本准备

石蜡切片：脱蜡至水 → 蛋白酶K消化 → 脱水。

冰冻切片：固定（4%多聚甲醛） → 通透（Triton X-100）。

细胞爬片：固定 → 通透。

染色体滴片：常规制备染色体标本。

2、FISH染色步骤

探针准备：将荧光标记探针稀释至工作浓度。

3、变性：

样本变性：70%甲酰胺/2×SSC，75℃加热5分钟。

探针变性：探针溶液75℃加热5分钟。

4、杂交：将变性后的探针滴加至样本上，盖上盖玻片，37℃湿盒中杂交过夜（4-16小时）。

5、洗涤：依次用2×SSC、0.1×SSC等洗涤液洗涤，去除未结合探针。

6、核染与封片：DAPI染色5-10分钟，抗荧光淬灭封片剂封片。

7、成像：荧光显微镜下观察，采集多通道图像。

服务内容与周期

实验结果示例

参考文献

1、SNORA49 negatively regulates self-renewal of liver cancer stem cells and hepatocarcinogenesis via suppressing SOX9 transcription

2、Intratumoral Collinsella aerofaciens exhibits antitumor activity in endometrial carcinoma through activation of the p53 signaling pathway

3、Highly efficient and robust π-FISH rainbow for multiplexed in situ detection of diverse biomolecules