免疫组化

服务简介

免疫组织化学染色（Immunohistochemistry, IHC）是一种利用抗原-抗体特异性结合原理，在组织切片上对特定蛋白进行定位、定性和半定量检测的经典技术。我们提供高质量、标准化的IHC染色服务，适用于石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片等多种样本，可检测细胞内或细胞膜上的目标蛋白，广泛应用于病理诊断、生物标志物筛选及基础科研领域。

实验原理

抗原-抗体结合：一抗特异性识别组织切片中的目标抗原（蛋白）。

信号放大与显色：二抗（标记有HRP或AP）结合一抗，加入显色底物（如DAB、AEC），在抗原位置产生有色沉淀。

复染与封片：苏木精复染细胞核，中性树胶封片。

结果判读：显微镜下观察，阳性信号呈现棕黄色（DAB）或红色（AEC），定位于细胞核、细胞质或细胞膜。

实验流程

1、样本准备

①石蜡切片：脱蜡至水 → 抗原修复（热修复或酶修复）。

②冰冻切片：固定 → 灭活内源性过氧化物酶 → 封闭。

③细胞爬片：固定 → 通透 → 封闭。

2、IHC染色步骤

①抗原修复：枸橼酸盐缓冲液（pH 6.0）热修复（微波或高压锅）。

②灭活内源酶：3% H₂O₂孵育10-15分钟，阻断内源性过氧化物酶。

③封闭：5% BSA或正常血清封闭非特异性结合位点。

一抗孵育：加入稀释后的一抗，4℃过夜或室温1-2小时。

二抗孵育：加入HRP标记的二抗，室温30-60分钟。

④显色：DAB或AEC显色液作用1-10分钟，显微镜下控制显色程度。

⑤复染：苏木精复染细胞核30秒-1分钟。

⑥脱水透明封片：梯度乙醇脱水 → 二甲苯透明 → 中性树胶封片。

3、质量控制

背景干净、阳性信号清晰、无非特异性染色。

细胞核复染均匀，结构完整。

服务内容与周期

应用领域

病理诊断：肿瘤标志物检测（如Ki-67、HER2、ER、PR、PD-L1等）。

生物标志物筛选：候选蛋白在疾病组织中的表达分布。

信号通路研究：磷酸化蛋白、转录因子、受体定位。

动物模型评价：靶点蛋白在药物干预后的表达变化。

细胞表型鉴定：鉴定原代细胞、干细胞分化标志物。

神经科学：神经元特异性蛋白（NeuN、MAP2）、胶质细胞标志物（GFAP、Iba1）。

免疫学研究：免疫细胞浸润（CD3、CD4、CD8、CD68、FoxP3）。

交付内容

染色成品：染色完成的载玻片，每张标签注明样本编号及抗体信息。

高清图片：显微镜下代表性视野图像，可提供明场或全景扫描图像。

半定量分析（可选）：阳性细胞百分比、平均光密度值（IOD/Area）等。

实验报告：详细记录抗体信息（货号、稀释比）、修复条件、染色流程、结果。

实验结果示例

PMID: 41310329

常见问题

Q1：IHC染色需要提供一抗吗？
客户可提供已验证的一抗，也可委托我司代购。我们提供抗体验证预实验，确保最佳稀释比。

Q2：石蜡切片和冰冻切片哪个更适合IHC？
石蜡切片形态保存好，适合绝大多数抗原，但需要抗原修复；冰冻切片无需修复，适合抗原表位易受损的抗体，但形态稍差。我们可根据抗体说明书推荐最佳方案。

Q3：如何判断染色结果是否特异性？
阳性信号应定位准确（如细胞核、细胞质或膜），阴性对照（不加一抗）无背景着色。

Q4：可以检测磷酸化蛋白吗？
可以。但需注意组织固定后及时处理，并加入磷酸酶抑制剂。部分磷酸化抗体可能需要特殊修复条件，我们可协助优化。

Q5：客户需要提供什么信息？
请提供样本类型（组织、切片、蜡块）、靶蛋白名称、一抗信息（如有）及下游检测需求（半定量）。