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2×UniTaq SYBR qPCR Master Mix（ROX-）
P1504
2×UniTaq SYBR qPCR Master Mix（ROX-)
- 货号： P1504
- 商品名称： 2×UniTaq SYBR qPCR Master Mix（ROX-)
- 规格： 5ml/包
- 价格： 1000
- 产品参数
- 货号： P1504
- 商品名称： 2×UniTaq SYBR qPCR Master Mix（ROX-)
- 规格： 5ml/包
- 价格： 1000
2×UniTaq SYBR qPCR Master Mix（-ROX）
【产品简介】
本产品是使用SYBR Green I 嵌合荧光法进行qPCR反应的专用预混液。核心组分Taq Polymerase是基于抗体法修饰的热启动聚合酶，具有特异性强、检测灵敏度高、扩增产量高等特点。配合特殊优化的buffer，可进行高特异性、高灵敏的qPCR扩增。本产品含有特殊的ROX，适配常用的qPCR仪器，无需在不同仪器上调整ROX的浓度。本产品是一款2×预混液，只需加入引物和模板即可进行扩增。
【适用范围】
本试剂用于DNA样本的扩增，可以扩增各物种来源的DNA，样本类型可以是基因组DNA、cDNA、质粒DNA等
【优点实例】
1、良好的扩增均一性：
实例一：
以HELA细胞cDNA为模板（10ng/20ul体系，以RNA量为准）扩增内参基因ACTIN-B，默认程序，48孔重复实验，最大孔间差＜0.4CT（0.39）。
实例二：
以HELA细胞cDNA为模板，进行10倍梯度稀释，四个浓度梯度，用ACTIN-B基因进行扩增，默认测序，扩增结果具有良好的一致性。
2、更广的可定量扩增区域：
以N-蛋白质粒为扩增模板，梯度稀释（1×108~10拷贝数）后进行绝对定量扩增测试，每孔上1ul模板（20ul体系/孔），默认程序下，均能有效特异的扩增且具有良好的定量精准度和曲线线性。
3、高分辨力：
以HELA细胞cDNA为模板，进行2倍梯度稀释，10个浓度梯度，用ACTIN-B基因进行扩增，默认程序扩增，结果可以看到本产品能准确的分辨2倍稀释的样品且扩增高度特异。
4、良好的检出率：
以HELA细胞cDNA为模板（10ng/20ul体系，以RNA量为准）对12个随机基因进行扩增测试，结果显示均能特异性扩增。
【货 号】 P1503-S
【保存条件】-20℃避光保存1年，解冻后可于2~8℃避光存放6个月；低温运输。
【使用说明】
1、反应液配制（以20ul体系为例）
试剂名称 | 使用量 | 终浓度 |
2×UniTaq SYBR qPCR Master Mix Forward Primer(10uM) Reverse Primer(10uM) DNA sample RNase free water | 10 ul 0.6 ul 0.6 ul X ul Up to 20ul |
0.3 uM 0.3 uM
|
注：a、引物的添加量以各引物的最终浓度为0.2~0.6uM，当扩增效率低时，可通过优化添加量来提高反应性能，
但要注意添加量过多时可能会产生非特异 性扩增。
b、如模板为未稀释的cDNA原液，使用体积不应超过反应总体积的1/10，过高的模板量会抑制反应的正常进行。
2、反应条件
以qPCR的基础循环为例,具体循环条件可根据需要进行调整。
a、该预变性条件适合大多数扩增反应，如模板结构复杂，可将预变性时间延长至5min以获得更好的效果。
b、延伸的温度请在55~72℃的范围内进行优化，可改善检测的灵敏度。c、融解程序使用默认程序。
【注意事项】
1、使用前应完全解冻，混匀后再使用。
2、本品应尽量避免反复冻融，以免造成酶活性的下降和dNTPs的降解。如每次用量较少，推荐小份分装使用。
3、由于本产品检测灵敏度极高，易被空气中的气溶胶污染，因此配制混合体系时请于超净工作台中操作，配制过程中请使用灭菌枪头、反应管，条件允许时使用专用移液器和带滤芯的吸头
【FAQ】
◇扩增曲线异常
1、扩增曲线非正常抖动：信号强度弱，通过系统矫正后产生。提高模板上样量重复实验或更换高质量模板。
2、扩增曲线断裂或下滑：模板浓度过高产生了反应抑制；基线扣除错误。降低模板上样量或将模板稀释后再上样；手动调整基线终点至CT值－3，重新分析
3、偶发个别曲线骤降：反应孔内有气泡残余。加样时要小心，进行反应前要仔细检查反应孔内是否有气泡残余，若有，可轻弹后离心即可消除。
◇扩增结束后无扩增曲线出现
1、确认程序中是否设置了信号采集步骤：两步法中，信号采集设置在退火延伸阶段；三步法中，信号采集设置在72℃延伸阶段。
2、确认引物是否降解：长时间未用的引物应先通过PAGE电泳检测完整性，以排除由于引物降解导致无扩张现象。
3、模板浓度太低：减少稀释度重新实验，一般从高浓度开始做起。
4、模板降解：重新制备模板，重复实验。
◇CT值较大
1、扩增效率极低：优化实验条件，尝试三步法扩增程序，或重新设计合成高特异引物。
2、模板浓度过低：减少稀释度或增加上样量。
3、模板降解：重新制备模板，重复实验。
4、反应体系中存在抑制剂：重新制备模板或使用qPCR专用的抽提、反转试剂盒
◇阴性对照出现明显扩增
1、反应体系存在污染：更换新的Master Mix、水、引物重新实验。配制反应时应避免气溶胶污染。
2、引物二聚体出现：根据融解曲线进行分析，必要时重新设计引物。
◇融解曲线出现多峰
1、引物设计不优：根据设计原则重新设计合成引物。
2、引物浓度过高：适当减低引物浓度
3、模板存在基因组污染：重新制备模板或使用qPCR专用反转录试剂。
◇绝对定量标准曲线拟合程度差
1、加样误差：提高模板稀释倍数，提高加样体积减少误差。
2、标准品降解：重新制备标准品，重复实验。
3、模板浓度过高：提高模板稀释度重新实验
◇实验重复性差
1、加样误差大：使用性能优良的移液器；提高模板稀释度，以大体积加样。
2、模板浓度过低：模板浓度低，重复性越差，减少模板稀释度或提高上样体积。
3、仪器失准：定期校准仪器。
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